Игх при раке предстательной железы

СОДЕРЖАНИЕ
0
40 просмотров
28 января 2019

Применение иммуногистохимических методов исследования в диагностике рака предстательной железы

С.А. Пульбере 1 , И.И. Бабиченко 2 , С.В. Котов 1 , Р.И. Гуспанов 1
1 ФГБОУ ВО«Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» МЗ РФ; Москва, Россия
2 ФГБОАУ ВО«Российский университет дружбы народов» МЗ РФ; Москва, Россия
Автор для связи: Пульбере Сергей Александрович

Тел.: +7 (926) 581-46-47; e-mail: pulpiv@mail.ru

Введение

Учитывая глобальное постарение населения, в том числе мужского, проблема дифференциальной диагностики и прогноза болезней предстательной железы у мужчин старше 40 лет в ближайшем будущем не утратит своей остроты. Рак предстательной железы (РПЖ) является одним из самых распространенных заболеваний у мужчин. Как свидетельствуют статистические данные, в 2015 г. в России РПЖ впервые диагностирован у 38812 пациентов, при этом прирост заболеваемости с 2005 г. составил 135%. В структуре смертности от злокачественных новообразований в 2015 г. в России РПЖ составил 7,6%, с 2005 по 2015 гг. прирост 42% [1]. Диагностическая ценность комплекса рутинных методов обследования пациентов с болезнями предстательной железы в настоящее время преимущественно определяется исследованием уровня простат-специфического антигена (ПСА) и его фракций, ТРУЗИ, пальцевого ректального исследования и МРТ, обладающих довольно низкой специфичностью.

Количество ложноотрицательных результатов при первичной биопсии простаты достигает 30%. Проводятся многочисленные исследования с внедрением в широкую практику различных методов для выявления данного новообразования на стадии локализованного процесса, однако диагностика поздних стадий и смертность от рака предстательной железы как России, так и в других странах остаются высокими. У многих мужчин изначально диагностируют местно-распространенные (38,5%) и метастатические (23,2%) опухоли [2]. Следовательно, одной из приоритетных задач остается выявление данного новообразования на стадии локализованного процесса.

В настоящее время иммуногистохимические (ИГХ) методы исследования занимают важную роль в дифференциальной диагностике новообразований различной локализации, в том числе и РПЖ. Не вызывает сомнения то обстоятельство, что развитие патологического процесса в предстательной железе носит мультифакторный характер и сопряжено с нарушением и перестройкой большей части внутриклеточных механизмов. Иммуногистохимические методы позволяют увеличить выявляемость РПЖ на стадии локализованного процесса, сократить количество необоснованных повторных биопсий и необходимость повторных госпитализаций. Одним из важных направлений являются исследования, показывающие роль различных факторов роста в развитии и факторов прогрессирования новообразований предстательной железы [3, 4]. Деградация базальной мембраны межклеточного матрикса и различных строгальных элементов, включающих в состав структурные белковые компоненты, определяют инвазию и метастазирование опухоли. Данный механизм опосредован секрецией протеолитических ферментов, таких как матричные металлопротеиназы (ММП) — клеточных энзиматических продуцентов. [5].

В связи этим, на протяжении нескольких десятилетий повышается интерес к ММП, вовлекающим внеклеточный матрикс в процессы структурно-функционального ремоделирования, чаще всего путем деградации цепей коллагена. Уже идентифицировано около 30 энзимов данного семейства, которые характеризуются наличием общих свойств: разрушают внеклеточный матрикс, секретируются в виде профермента и активируются в результате протеолитического расщепления, проявляют активность в нейтральной среде. Однако для большинства из них до сих пор четко не обозначена их роль. В физиологических условиях существуют различные биологические механизмы по предотвращению протеолиза тканей, вызванного активацией ММП, такие как секреция клетками стромы тканевых ингибиторов ММП илиTIMP (tissue inhibitor of metalloproteinases). [4, 5, 6].

Ki-67 — это специфический белок, антиген ракового процесса, который является регуляторным. Его появление соответствует вступлению клетки в митоз, что позволяет использовать его в качестве универсального маркера пролиферации при оценке роста злокачественных опухолей, в том числе и РПЖ. Индекс Ki-67, определяемый как отношение количества клеток с интенсивной ядерной реакцией на Ki-67 к общему числу клеток, является независимым показателем прогноза рецидива и выживаемости у больных РПЖ. [7, 8].

На сегодняшний день описаны около 30 типов коллагена, которые кодируются различными генами. Они отличаются друг от друга по аминокислотной последовательности, а также по степени модификации-интенсивности гидроксилирования или гликозилирования. Общим для всех коллагенов является присутствие их во внеклеточном матриксе. Коллаген IV является основным компонентом базальной мембраны эпителиальных клеток, встречается в стенке артериальных сосудов и собственном веществе соединительной ткани. Инвазивные свойства опухолевых клеток связаны с разрушением этого важного компонента соединительной ткани [9].

В данном исследовании с использованием иммуногистохимических методов проведен анализ продукции матриксной ММП 9 типа, ингибитора металлопротеиназы TIMP-1, маркера пролиферации Ki-67, и изучение распределения коллагена IV в неизмененных клетках секреторного эпителия при доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) и атипических клетках аденокарциномы простаты различных градаций по шкале Глисона с целью изучения молекулярных механизмов инвазивного роста рака предстательной железы.

Материалы и методы

Когорта пациентов, включенных в исследования составила 184 мужчин, разделенных на 2 группы, средний возраст 68,2±2,17 лет. 65 пациентов с ДГПЖ и 118 пациентов с верифицированным раком предстательной железы различной степени анаплазии.

Для проведения ИГХ исследовании использовались следующие антитела к антигенам человека: моноклинальные мышиные антитела к белку Ki-67 (MM1, Diagnostic Biosystems, 1: 200); моноклинальные мышиные антитела к коллагену IV (PHM-12, Thermoscientific, 1:100); очищенные антитела кроличьей антисыворотки к матриксной металлопротеиназе-9 (Thermoscientific, 1:400); моноклинальные кроличьи антитела к ингибитору TIMP-1 (EPR 1550, 1:100, EPITOMICS).

Распределение коллагена IV в базальной мембране желез предстательной железы и строме оценивали полуколичественным методом в баллах по следующим показателям: 0 — отсутствие коллагена вдоль базальной мембраны и стромы; 1 — наличие тонкой полоски коллагена; 2 — толстая полоска коллагена вдоль базальной мембраны, сравнимая по толщине и интенсивности окрашивания со стенкой сосудов. Продукцию ММП-9 исследовали в различных опухолевых образованиях: ДГПЖ и аденокарциноме простаты различной градации от 2 до 5. Как правило, протеиназа выявляется в цитоплазме опухолевых клеток в виде мелких или крупных гранул, при этом отмечается различная интенсивность окрашивания. Оценку интенсивности ИГХ реакции с MMП-9 проводили в баллах по следующим параметрам: 0 — отсутствие коричневых гранул в цитоплазме клеток, 1 — наличие отдельных мелких гранул в цитоплазме, 2 — распределение в отдельных клетках крупных гранул, 3 — наличие крупных гранул в цитоплазме большинства клеток. Оценку интенсивности ИГХ реакции с ингибиторомTIMP-1 проводили по той же бальной шкале, что и ММП-9.

Статистическую обработку полученных данных проводили с помощью программы STATISTICA 10.0, с последующим математическим анализом полученных материалов. Корреляционные взаимоотношения между числом Глисона опухоли, ПСА, индексом пролиферации клеток, выраженностью продукции оценивали с помощью коэффициента корреляции Спирмена (rs).

Результаты и обсуждение

Пропорционально увеличению возраста пациентов в неизмененных эпителиальных клетках предстательной железы увеличивается продукция показателя клеточной пролиферации Ki-67 (3,24±0,61), но различия статистически недостоверны (р>0,05). В биоптатах пациентов с ДГПЖ отдельно расположенные пролиферирующие клетки локализовались только в базальном клеточном слое, пролиферативная активность клеток секреторного клеточного слоя не определялась. В аденокарциномах различных градаций выявлен широкий спектр пролиферативной активности секреторных железистых клеток (рис. 1а). При исследовании больных с опухолями 2-й и 3-й градации по шкале Глисона выявлена умеренная пролиферативная активность секреторных опухолевых клеток, где ИП Ki-67 составил 5,3+1,1% и 7,2+1,4%, (р

Особенности ранней диагностики рака простаты

Ранняя диагностика рака предстательной железы (РПЖ) является одной из приоритетных задач современной урологии и здравоохранения в целом. В настоящее время, в большинстве экономически развитых стран Европы и Северной Америки, РПЖ выходит на второе, а в США на первое место по распространенности среди онкологических заболеваний. В России РПЖ занимает второе место после меланомы кожи и значительно превосходит злокачественные новообразования легких и желудка. Среди онкоурологической патологии РПЖ выявляется чаще, чем опухоль мочевого пузыря и почек.

Внимание исследователей к проблеме РПЖ связано не только с увеличением общего количества больных, но и с ростом смертности от этого заболевания. Причем, характерным является быстрый рост числа вновь выявленных случаев РПЖ. Столь резкий рост заболеваемости большинство урологов объясняют широким распространением программы скрининга РПЖ, усовершенствованием техники пункционной биопсии предстательной железы. Определение ПСА является обязательным для всех мужчин в возрасте от 45 лет. Сейчас пороговым значением ПСА является 2,5 нг/мл у мужчин в возрасте до 65 лет. При значении ПСА, превышающем 2,5 нг/мл, показана биопсия предстательной железы. Методика выполнения биопсии из 6 точек, так тазываемая секстантная биопсия,под контролем трансректального ультразвукового исследования (ТРУЗИ) была предложена в 1989 году (K. Hodgeetal). В последующих исследованиях было установлено, что первичная расширенная биопсия под ТРУЗИ контролем из 10 – 12 точек, картирование простаты в ходе выполнения биопсии улучшает выявляемость РПЖ на 24 – 38% по сравнению с биопсией из 6 точек. Среди показаний к повторной биопсии выделяют такие морфологические данные как: выявление в первичной биопсии ПИН высокой степени и участков атипической мелкоацинарной пролиферации (ASAP). В 80% случаев аденокарцинома простаты располагается в перефиреческой зоне и морфологически представлена железистой атипией. Железы аденокарциномы мредставлены мелкими единообразными железами, клетки которых содержат видимые ядрышки, железы не имеют слоя базальных клеток и не имеют дольчатой организации. Термин атипическая мелкоацинарная пролиферация используется в тех случаях, когда в биоптате простаты выявляются фокусы атипических желез, подозрительные на аденокарциному, но в то же время не соответствующие указанным минимальным диагностическим критериям РПЖ. Данный термин является собирательным и включает в себя как фокусы, подозрительные на аденокарциному, так и фокусы аденокарциномы, в объеме не достаточном для постановки диагноза. Выявление фокусов, подозрительных на аденокарциному, без возможности выполнения иммуногистохимического исследования, является показанием для повторной биопсии простаты. В нашей клинике всем пациентам в случае выявления фокусов мелкоацинарной пролиферации проводится иммуногистохимическое исследование (ИГХ). В клинике урологии «Московского государственного медико-стоматологического университета им. А.И. Евдокимова» МЗ РФ с декабря 2011 года по настоящее время с целью диагностики рака простаты, пациентам с атипической мелкоацинорной пролиферацией выполняется серия ИГХ исследований. Всем пациентам в неоднозначных для постановки диагноза случаях выполненяется ИГХ исследование с использованием антител Cytoceratin HMWClone 34βE12 и AMACRClone 13H4 (Dako), согласно протоколу DakoNorthAmerica. Согласно полученным результатам, атипическая мелкоацинарная пролиферация чаще всего представляет собой аденокарциному простаты. Иммуногистохимические методы окраски тканей, полученных в ходе биопсии предстательной железы, являются важным диагностическим исследованием у пациентов с подозрением на рак простаты. И позволяют повысить диагностическую значимость биопсии простаты сократив количество повторных биопсий у пациентов с подозрением на рак предстательной железы.

Рисунок №1 Нервные волокна в парапростатической ткани и капсуле простаты ИГХ окраска S100

Рисунок №2 Парасимпатические нервные волокна в парапростатической ткани Окраска ИГХ Nitric oxide

Рисунок №3 Симпатические нервные волокна в парапростатической ткани окраска ИГХ Tyrosine hydroxylase

Рисунок №4 Фокус ацинарной аденокарциномы простаты Глисон 3+3 окраска ИГХ AMACR

Рисунок №5 Фокус ацинарной аденокарциномы простаты Глисон 3+3 окраска ГЭ

Рисунок №6 Фокус ацинарной аденокарциномы простаты Глисон 3+3 окраска ИГХ Cytokeratin HMW

Расшифровка результатов биопсии простаты: норма и отклонение

Гистологическое исследование биологического материала, который берется в ходе биопсии, позволяет подтвердить или опровергнуть наличие в тканях раковой опухоли. Сегодня эта методика активно используется в урологии с целью диагностики онкологии предстательной железы. Результаты биопсии простаты предоставляются медицинским центром, который проводил забор материала. Если обычный пациент получит их на руки, с высокой долей вероятности можно сказать, что сам он в них не разберется. На самом деле, читать расшифровку не так сложно, нужно лишь предварительно ознакомиться с базовой информацией о направлении.

Содержание статьи

Показания к проведению биопсии простаты и преимущества методики

Проведение биопсии предстательной железы показано при подозрении на формирование ракового образования в теле органа. В ходе манипуляции собираются пораженные и здоровые ткани железистой массы, которые подвергаются лабораторным исследованиям. Полученные результаты не только подтверждают присутствие рака в организме, но и предоставляют информацию о степени агрессивности недуга. Это позволяет подобрать оптимальный вариант лечения опухоли, снизить вероятность ее распространения на другие системы.

Чаще всего диагностическая манипуляция назначается в результате выявления тревожных симптомов или плохих результатов анализов. Врач может направить пациента на биопсию при выявлении узелков или уплотнений в простате в результате проведения ректального пальцевого осмотра. Повышенный уровень лейкоцитов или антигенов в моче, завышенные показатели ПСА в крови – также могут служить показаниями к забору биологического материала. В некоторых случаях исследование проводится на фоне течения других патологических состояний предстательной железы, чтобы исключить потенциальные риски.

Точность результатов – всего одно из многочисленных преимуществ диагностического подхода. Он проводится в амбулаторных условиях, требует минимальной подготовки и имеет минимальный срок восстановления. Благодаря ему можно отличить рак от гиперплазии простаты и быстрее начать профильное лечение. Если все сделать правильно, то с помощью биопсии можно диагностировать рак на самой ранней стадии его развития, что повышает вероятность благоприятного исхода.

Моменты, которые могут повлиять на результаты

Чтобы получить максимально точные результаты биопсии простаты, необходимо учесть несколько нюансов организации и проведения процедуры. Их игнорирование может привести к низкой информативности итогов. Это чревато постановкой ошибочного диагноза или пропуском патологии.

Основные правила подготовки к биопсии:

  1. Врач должен получить список всех медикаментов, натуральных или народных препаратов, которые пациент принимает или принимал в недавнем прошлом.
  2. Специалиста нужно уведомить о наличии аллергии и недавно перенесенных заболеваниях.
  3. За 10 дней до процедуры прекращается прием антикоагулянтов, иначе можно спровоцировать кровотечение. Если были зафиксированы какие-то проблемы со свертываемостью крови, в день сеанса этот компонент должен быть проверен.
  4. Нередко перед проведением биопсии мужчине предлагается пропить короткий курс антибиотиков для снижения риска инфицирования тканей.
  5. Сегодня биопсия чаще всего проводится под контролем УЗИ, но в некоторых случаях с той же целью используется аппарат МРТ. Такой подход требует снять все металлические предметы, врач должен быть осведомлен о наличии металлических протезов, кардиостимулятора.
  6. Перед проведением биопсии мужчине положен лишь легкий ужин. За пару часов до манипуляции ему ставится очистительная клизма.

Современные способы сбора и обработки материала практически исключают возникновение сложностей в технической части диагностики. Любые возникшие проблемы обычно являются результатом неправильной подготовки мужчины к процедуре или низкой квалификации специалиста.

Как долго ждать расшифровку биопсии?

Гистологический анализ тканей простаты занимает не так много времени, как думают многие. В среднем с момента сбора материала до получения расшифровки проходит 5-7 дней. Этот период может незначительно увеличиваться под влиянием ряда внешних факторов.

В частности, необходимость проведения иммуногистохимического исследования увеличивает базовые сроки. Передача собранного сырья в удаленную лабораторию или работа с особенно сложным случаем тоже могут добавить к стандарту несколько дней. Все эти моменты следует уточнить в выбранной клинике заранее, это еще и позволит оценить профессионализм ее работников.

Расшифровка по шкале Глисона

В 70-х годах прошлого века американский врач Дональд Глисон разработал шкалу оценки состояния тканей предстательной железы для постановки дифференциального диагноза. Она используется и сегодня в качестве основы процесса диагностирования онкологии простаты. С ее помощью анализируется состояние тканей и проводится расшифровка результатов.

Базовая информация по технологии

Шкала Глисона состоит из пяти ступеней, каждая из которых соответствует определенной степени злокачественности клеток. Гистолог анализирует собранные образцы и выбирает из них два самых злокачественных. Каждому из экземпляров присваивается своя оценка по шкале от 1 до 5, где 1 – наименее измененные данные, а 5 – показатель максимальной злокачественности. Эти 2 показателя суммируются и получается сумма Глисона – ее показатель может находиться в пределах от 2 до 10, указывая на степень агрессивности болезни.

Примечательно, что первая цифра анализа соответствует образцам, составляющим больше половины изученного объема. Вторая будет представлять меньшую часть исследуемого материала. Получается, что формула 2+3 будет выглядеть менее агрессивной, чем 3+2 из-за соотношения компонентов. Поэтому в расчет следует принимать не только сам результат, но и положение слагаемых в итоговой таблице.

Правила чтения показателей

Рассматривая результаты биопсии простаты, нормой можно называть показатель в 2 единицы. Он указывает на присутствие в образце исключительно здоровых клеток. В случае выявления показателя вплоть до 6 единиц ставится низкая степень агрессивности тканей образования. Цифра 7 указывает на среднюю степень тяжести ситуации. Результат в 8-10 единиц свидетельствует о высоком уровне агрессивности раковых клеток.

Каждый из исходов требует особого подхода к планированию дальнейших действий:

  • Низкая степень (6 и меньше). Возможны самые разные способы лечения опухоли. В ряде случаев врачи даже рекомендуют немного подождать и последить за динамикой. К выжидательной терапии прибегают только при условии, что биопсия выявила менее двух столбиков с показателем поражения не более 50%. Риск роста и распространения рака низкий. Пациент должен регулярно сдавать кровь на ПСА, проходить ректальное пальцевое обследование, УЗИ, биопсию, МРТ.
  • Средняя степень (7). Указывает на вероятность распространения опухоли на другие органы и системы, но при уровне ПСА менее 20 нг/мл она довольно низкая. На этой стадии могут быть использованы медикаменты, лучевая терапия, хирургическое удаление новообразования. Выбор оптимального варианта воздействия зависит от возраста пациента, наличия у него противопоказаний и сопутствующих патологий.
  • Высокая степень (8-10). Агрессивный сценарий течения онкологии. Болезнь может в любой момент распространиться на ткани за пределами предстательной железы. Лечение требуется немедленное и комплексное, зачастую, агрессивное.

. Независимо от результатов исследования, только врач может решить, какие методы диагностики и варианты лечения могут быть использованы в конкретном случае. Любые самостоятельные действия несут большие риски и могут серьезно навредить.

Полученная расшифровка биопсии не является руководством к действию для людей, которые ничего не понимают в онкологии

Специфика иммуногистохимического исследования

Данное направление не входит в базовый вариант проведения гистологического обследования материала, его проводят дополнительно. Подход очень важен в случае необходимости проведения дифференциальной диагностики рака. Иногда бывает сложно отличить злокачественную аденокарциному от доброкачественной опухоли, которая своим составом и поведением похожа на онкологию. Также этот технологический подход позволит выделить раковое поражение простаты и не принять его за рак других органов, например, толстого кишечника.

Патоморфологическая расшифровка онкологии

С помощью классификации патологического процесса по системе TNM специалисты устанавливают не только размеры опухоли и степень поражения простаты. Она позволяет оценить стадию вовлеченности в болезнь лимфатических узлов, наличие или отсутствие метастазов.

Значение Т-показателя

Кодировка, которая обозначает первичную опухоль. Знак Т1 указывает на минимальные размеры образования. Оно не выявляется при пальцевом исследовании предстательной железы или при использовании различных подходов визуализации тканей. И все же в ходе гистологического исследования массы выявляется наличие раковых клеток. Обозначение Т2 свидетельствует о значительных размерах опухоли, которая способна занимать не менее одной доли пораженного органа. Иногда уже на этой стадии поражение охватывает обе доли простаты.

Код Т3 ставится в случаях, когда рак выходит за пределы железы и прорастает в ее капсулу. Также на этой стадии он может затрагивать семенные пузырьки. В случае присутствия обозначения Т4 речь идет уже об обширном распространении онкологии на ткани, расположенные рядом с предстательной железой.

Значение N-показателя

Это обозначение отвечает за степень поражения лимфатических узлов. Если за буквой следует 0, это указывает на чистоту образований. Обозначение N1 характерно для поражения всего одного лимфатического узла регионарного плана. Его диаметр не может превышать 2 см. Кодировка N2 используется при вовлеченности в патологический процесс не менее двух лимфоузлов, диаметр которых составляет от 2 до 5 см. Последний показатель – N3 – свидетельство поражения лимфатических узлов в диаметре более 5 см.

Значение М-показателя

Для этой части кодировки может быть характерен только один из двух показателей. Цифра 0 используется при локализации патологического процесса. Он не распространяется дальше лимфатических узлов регионарного типа, если они и поражены. Цифра 1 свидетельствует о распространении метастазов. Она не зависит от того, какие именно органы поражены, в каком количестве и объеме.

В каком виде предоставляются результаты?

Все результаты проведенной биопсии предстательной железы вносятся в специальное заключение, представленное в виде таблицы. Если в ходе исследования гистологом было выявлено злокачественное новообразование, он обязан указать всю информацию, полученную о нем. В расшифровке гистологии можно найти определение типа опухоли, формулу и сумму Глисона, информацию по распространенности онкологии и ее локализации. Важным показателем являются данные о хирургическом крае образования, по которым можно спрогнозировать вероятность рецидива. Указывается наличие поражения лимфатических узлов и нервов.

Опытный специалист, получив составленный гистологом документ, сможет подтвердить или исключить вероятность наличия рака. Иногда данные оказываются спорными, тогда требуется повторное проведение манипуляции. Расшифровка анализа позволяет получить полное представление и патологии, ее типе и локализации. Эти данные необходимы для планирования схемы лечения, при которой риск рецидива будет минимальным.

Кажется, что читать предоставленную информацию не так сложно, но лучше все же не заниматься этим самостоятельно, а довериться профессионалу. Случается, что в документ закрадывается ошибка, очевидная онкологу или урологу, а пациенты ее не видят и начинают переживать раньше времени.

Источники: http://www.uroweb.ru/article/primenenie-immunogistohimicheskih-metodov-issledovaniya-v-diagnostike-raka-predstatelnoy-gelezi, http://www.urocon.ru/pages/osobennosti-rannej-diagnostiki-raka-prostaty, http://uroguru.com/diagnostika/prostata/rezultaty-biopsii-prostaty-norma.html

Комментировать
0
40 просмотров
Комментариев нет, будьте первым кто его оставит

Это интересно
Adblock detector